Hệ thống nuôi cấy MSC NutriStem® XF Xeno-Free, Serum-Free Culture System được thiết kế đặc biệt, do hãng Biological Industries (BI) sản xuất, để hỗ trợ sự tăng trưởng của hMSC từ đa dạng nguồn. Đây là hệ thống môi trường được xác định là không serum, không xeno, do vậy có thể đảm bảo tốt hiệu quả nuôi cấy tăng sinh của hMSCs từ nhiều nguồn như tủy xương, mô mỡ, dây rốn.
MSC NutriStem® XF Xeno-Free, Serum-Free Culture System bao gồm những ưu điểm lớn như hiệu suất phân tách lớn và tăng trưởng tế bào vượt trội, duy trì ổn định những đặc tính tốt của hMSCs. Hệ thống này được sản xuất dưới điều kiện cGMP (good manufacturing practice-compliant) luôn giữ được hiệu quả cao khi nuôi cấy nhiều đợt, giúp tiết kiệm tiền và thời gian cho các nghiên cứu viên tế bào gốc hiện nay.
Môi trường hoàn chỉnh để nuôi cấy hMSCs (Complete MSC NutriStem® XF Medium) của BI cung cấp gồm 2 thành phần được dùng kết hợp và không tách rời:
- MSC NutriStem® XF Basal Medium là môi trường nuôi cấy cơ bản có những thành phần dinh dưỡng thiết yếu cho sự phát triển của hMSCs.
- MSC NutriStem® XF Supplement Mix gồm những thành phần bổ trợ giúp tăng hiệu quả nuôi cấy.
Khi chuẩn bị nuôi cấy, 2 thành phần này được pha với nhau theo tỷ lệ thích hợp để có được môi trường Complete MSC NutriStem® XF Medium. Hỗn hợp này được bảo quản ở 2- 8°C lên đến 30 ngày và tránh tiếp xúc ánh sáng.
Để hỗ trợ sự bám dính của hMSCs vào vật dụng trước khi nuôi cấy tăng sinh, hãng BI đưa ra lời khuyên là cần sử dụng kết hợp Complete MSC NutriStem® XF Medium với MSC Attachment Solution. Cụ thể, MSC Attachment Solution được pha loãng với Dulbecco’s PBS (w/o Ca & Mg) rồi phủ đều lên bề mặt dụng cụ nuôi cấy, trước khi đưa tế bào vào nuôi cấy trong Complete MSC NutriStem® XF Medium.
Một bước không thể thiếu khi nuôi cấy là phân tách các hMSCs. Để tối ưu hóa công việc này, BI cung cấp dung dịch hỗ trợ phân tách tốt tế bào là Recombinant Trypsin Solution +/- EDTA. Đây là dung dịch phân tách được lựa chọn thay thế cho Trypsin có các thành phần từ động vật có chứa chymotrypsin, carboxypeptidase A và các protease có thể gây ô nhiễm khác. Tức là dùng Trypsin tái tổ hợp thay cho Trypsin thô. Để hỗ trợ tốc độ phân ly tế bào, EDTA cũng được bổ sung thêm vào dung dịch này. Do vậy tùy vào mục đích và loại hMSCs nuôi cấy, bạn có thể lựa chọn Recombinant Trypsin Solution có hoặc không có EDTA.
Để tránh ảnh hưởng của Trypsin khi nuôi cấy dài hạn, Cell Dissociation Solution (non-enzymatic) và Soybean Trypsin Inhibitor (SBTI) được bổ sung thêm để tăng cường sức sống của tế bào. Hai chất này lần lượt có vai trò giúp ổn định các thành phần trong tế bào và bất hoạt Trypsin, tránh việc tế bào bị phá hủy bởi enzyme này khi nuôi cấy dài hạn.
Sau khi nuôi cấy, tế bào cần được bảo quản để duy trì việc sử dụng lâu dài cho các nghiên cứu. Hiểu được mong muốn đó, hãng BI đưa ra sản phẩm NutriFreez™ D10 Cryopreservation Medium với những ưu điểm là bao gồm cả 10% DMSO and Methylcellulose giúp bảo quản tế bào ở điều kiện lạnh, không chứa thành phần động vật, không có protein có thể ảnh hưởng đến chất lượng tế bào. Sau khi làm lạnh và rã đông, có thể thấy mật độ tế bào cao, phân tách tối đa, cũng như hiệu suất tăng trưởng tốt được đảm bảo.
Việc lựa chọn chất lượng môi trường nuôi cấy là yêu cầu quan trọng với mỗi phòng thí nghiệm sinh học tế bào. Với những ưu điểm đã được xác định, được chứng minh bằng thực nghiệm trên động vật, hệ thống MSC NutriStem® XF Xeno-Free, Serum-Free Culture System hoàn toàn là một lựa chọn tối ưu cho các nhà nghiên cứu hiện nay đang hướng tới.
Nguồn cho bài đăng:
- Bakopoulou A., et al (2017), “Isolation and prolonged expansion of oral mesenchymal stem cells under clinical-grade, GMP-compliant conditions differentially affects “stemness” properties”, Stem Cell Res Ther., 8(1), p. 247.
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/29096714
- Ann H. Klopp., Erika L. Spaeth, et al (2015), “Tumor Irradiation Increases the Recruitment of Circulating Mesenchymal Stem Cells into the Tumor Microenvironment”, Cancer Res., 67(24), p. 11687–11695.
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4329784/
- Shirley H.J. Mei, et al (2014), “Isolation and Large-Scale Expansion of Bone Marrow-Derived Mesenchymal Stem Cells with Serum-free Media under GMP-Compliance”, Microsoft PowerPoint – ISCT meeting 2014.
http://citeseerx.ist.psu.edu/viewdoc/download?doi=10.1.1.851.6688&rep=rep1&type=pdf
- Lopez, M. Weiss, et al. (2012), “Identification of Optimal Conditions for Generating MSCs for Preclinical Testing: Comparison of Three Commercial Serum-Free Media and Low-Serum Growth Medium”, From 18th ISCT Annual Meeting, Seattle, USA.
https://cdn.ymaws.com/www.celltherapysociety.org/resource/resmgr/2012_annualmtgpresentations/isct2012corporateguide.pdf
- Zhen Cai, et al (2015), “Chondrogenesis of Human Adipose-Derived Stem Cells by In Vivo Co-graft with Auricular Chondrocytes from Microtia”, Aesthetic Plastic Surgery, 39 (3), p. 431–439.
https://link.springer.com/article/10.1007%2Fs00266-015-0481-0
- Ana CC Paula, et al (2015), “Human adipose tissue-derived stem cells cultured in xeno-free culture condition enhance c-MYC expression increasing proliferation but bypassing spontaneous cell transformation”, Stem Cell Res Ther., 6(1), p. 76.
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4455683/
- Escobar CH, Chaparro O. (2016), “Xeno-Free Extraction, Culture, and Cryopreservation of Human Adipose-Derived Mesenchymal Stem Cells”, Stem Cells Transl Med., 5(3), p. 358-65.
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/26838269
