Phép đo tế bào dòng chảy nhiều màu để xác định và mô tả đặc điểm của quần thể tế bào đuôi gai ở người trong máu ngoại vi
Giới thiệu
Các tế bào đuôi gai (DC) là một nhóm các tế bào miễn dịch bẩm sinh xuất phát từ tủy xương và được phân bổ đến các cơ quan bạch huyết, mô và máu. Tế bào DC thể hiện một vai trò quan trọng với miễn dịch bẩm sinh và đáp ứng và được nhìn nhận như là tế bào trình diện kháng nguyên (APC) giúp khơi mà cho tế bào T ngây thơ và khơi dậy các đáp ứng tế bào T đối với kháng nguyên lạ. Trong bài viết này, chúng tôi mô tả việc sử dụng một panel nhiều màu phân tích tế bào dòng chảy để phân tích quần thể các tế bào DC ở máu người sử dụng hệ thống BD FACSymphony™ A3 Cell Analyzer 30 thông số.
Panel nhiều màu phân tích tế bào dòng chảy được mô tả ở đây tạo nên từ 20 kháng thể gắn huỳnh quang bao gồm các thuốc thử thuộc BD Horizon Brilliant™. Sử dụng panel nhiều màu, chúng tôi xác định kiểu hình và tần suất của các phân nhóm tế bào DC trong mẫu tế bào đơn nhân máu ngoại vi (PBMCs) từ những người khỏe mạnh. DC vẫn thường được phân loại thành DC điển hình (trước đây gọi là DC dòng tủy xương) bao gồm cDC1 và cDC2, và DC không điển hình. Cấu hình hệ thống lọc sáng của BD FACSymphony A3 Cell Analyzer mang lại tính linh hoạt để gán các chất phát huỳnh quang với 5 nguồn laser cho phép phân biệt không chỉ các nhóm tế bào DC điển hình và không điển hình, mà còn cả các DC đặc hữu như Axl⁺ Siglec6⁺ DC (AS DC) và DC tương bào (pDC)
Quy trình
Mẫu tế bào PBMC tươi được phân lập từ máu tổng số của người hiến khỏe mạnh (n = 3) bằng ly tâm tỉ trọng sử dụng Ficoll™ Paque Plus (Cytiva). Một hỗn hợp kháng thể được chuẩn bị sử dụng BD Horizon™ Brilliant Stain Buffer Plus trộn với một thể tích cụ thể của mỗi kháng thể cho một xét nghiệm. PBMC được nhuộm với kháng thể trong 30 phút trong bóng tối tại nhiệt độ phòng. Các đối chứng đơn màu và fluorescence minus one (FMO) được xử lý song song với panel đầy đủ. Sau khi nhuộm, các tế bào được rửa 3 lần với BD FACS™ Stain Buffer và thu thập trên BD FACSymphony A3 Cell Analyzer. Dữ liệu phân tích bằng phần mềm FlowJo™ v10.7.
Bảng 1. Cấu hình thiết bị và lựa chọn thuốc thử.
Các dấu ấn bề mặt tế bào và các dòng kháng thể được sử dụng trong cocktail trong panel DC nhiều màu trong bảng 1. Các chất phát huỳnh quang được chọn dựa trên hệ thống BD FACSymphony A3 Cell Analyzer có cấu hình 5 laser, 28 cảm biến huỳnh quang.
Kết luận
Dữ liệu được trình bày ở đây cho thấy khả năng thực hiện phân tích dòng chảy tế bào 20 màu trên tế bào DC người với hệ thống BD FACSymphony A3. Panel kháng thể huỳnh quang cho phép xác định các phân nhóm DC chính ở người, xác nhận sự biểu hiện của các dấu ấn đặc trưng quần thể DC và phù hợp cho cả phân tích thường quy và phân tích không giám sát. BD FACSymphony A3 mang lại tính linh hoạt và phổ rộng để xây dựng tổ hợp 28 màu để xác định kiểu hình miễn dịch của các quần thể tế bào miễn dịch.
Tài liệu tham khảo
- Jongbloed SL, Kassianos AJ, McDonald KJ, et al. Human CD141 + (BDCA-3)+ dendritic cells (DCs) represent a unique myeloid DC subset that cross-presents necrotic cell antigens. J Exp Med. 2010;207(6):1247-1260. doi:10.1084/jem.20092140
- Villani AC, Satija R, Reynolds G, et al. Single-cell RNA-seq reveals new types of human blood dendritic cells, monocytes, and progenitors. Science. 2017;356(6335):eaah4573. doi:10.1126/science.aah4573
- Collin M, Bigley V. Human dendritic cell subsets: an update. Immunology. 2018;154(1):3-20. doi:10.1111/imm.12888
